تقنية الاستنساخ بتبتيك أذان الأنعام (وَلَآَمُرَنَّهُمْ فَلَيُبَتِّكُنَّ آَذَانَ الْأَنْعَامِ)
تتميز جميع خلايا الجسم كخلايا الكبد والكلية وغيرها باحتوائها على اعداد كاملة للكروموسومات.
ان عملية نقل الجينات من أذان الابقار تمت أولا, بقطع قرص صغيير من خلف جلد الأذن. هذا الجزء من الأذن تم ازالة الشعر من عليها ووضعها فى محلول معقم, ايثانول 70% ثم وضعها فى محلول ملحى للحفاظ على الخلايا.
وقد أثبتت الأبحاث أنه يمكن أخذ العينه من الحيوانات بمختلف الاعمار كما يمكن اخذ العينة من حيوان ميت قبل بضع ساعات. هذه القطعة تنقل للمعمل بأسرع ما يمكن وتقطع الى أجزاء صغيره وتهضم بانزيمات لاخراج خلايا الفيبروبلاست من الأنسجه, واستخدام الانزيمات ليست بالضروره لأن خلايا الفيبروبلاست تزحف أتوماتيكيا خارج النسيج من حوافه لتلتصق بقاع طبق البترى الذى يحتوى على نسيج نامي وتبدأ فى الانقسام بدون تأثير هذا النسيج عليها. عامة الخلايا تنمو لعدة أسابيع وتزال بعد ذلك من قاع الطبق وتعالج باستخدام الانزيمات وتسيح وتنمو حتى تتمكن من عمل طبقه تغطى قاع طبق البترى , ثم تنقل الى أطباق عده قبل عملية الاستساخ.
البويضات تفصل من المبيض من أبقار ذبحت, وتنقل الى المعمل تحت ظروف درجة الحراره العاديه (حرارة الحجره) وتفحص بالميكروسكوب وتستخدم فقط البويضات التى لها العديد من الطبقات (بويضه محاطه بالخلايا).
ثم يتم عمل ما يسمى بعملية الانضاج ويستغرق هذا 18 ساعه تقريبا, وبعد ذلك تزال الخلايا المحيطه حولها ويزال بعد ذلك الكروموسوم وبما أن الكروموسوم صغير من الصعب رؤيته فتستخدم صبغه تسمى صبغه ضوئيه (Fluorescent dye) ليتم بها رؤية الكرموسوم المراد ازالته.ويتم ازالة الكروموسوم من البويضه باستخدام ميكرسكوب ذات قوة تكبيير400 وذلك لأن حجم البويضه 0.1 ملم, وتتم الازاله باستخدام أنبوبه ميكروسكوبيه وادخالها الى داخل البويضه من خلال غطاء البويضه ( Soft shell surrounding egg) وتستخدم ضوء الأشعه الفوق بنفسجيه مع وجود الصبغه الضوئيه (Fluorescent dye) لتحديد كروموسوم البويضه.
بعد سحب الكروموسوم , وحقن الكروموسوم الناتج من خلية الأذان (الفبروبلاست) داخل البويضة تستخدام صدمة كهربائية لغرض دمجهما حيث ان النبضات الكهربائية على الغشاء الخلوى للبويضه تعمل على دفع الكروموسوم الناتج من خلايا اذان البقره الى داخل سيتوبلازم البويضه , شكل (8) (1,2,3).
شكل (8): يبين عملية نقل الكروموسوم من خلابا الجلد الى بويضه مفرغه بفعل الصدمه الكهربائيه
الخطوه الثانيه هى استحثاث الكروموسوم للانقسام باستخدام مستحثات صناعيه ويترك المزيج لمدة 7 الى 9 أيام فى مزرعه. خلال هذه الفتره يحدث انقسام وبعض التنوع للخلايا , بمقدار حوالى 80 الى 200 خليه ويمكن تحديد ورؤية الجنين والمشيمه عند هذه الفتره (1,31).